复苏的细胞背景脏和出现小黑点，这在各大实验室都有发生过，这是很正常的，原因有很多，比如细胞碎片、细胞器折光、凋亡小体、血清中的沉淀物、微生物污染（如细菌、真菌、支原体等）或黑胶虫污染等等。

如何区分是细胞碎片还是微生物污染呢？

南京东极实验室建议，可以通过以下几个步骤简单辨别：

1、看黑点动不动：如果黑点在显微镜下很活跃，动来动去，那可能是细菌污染。细胞碎片通常不会移动或只表现出布朗运动。

2、看黑点的形状：如果是细菌，那培养液中一般会出现大量相同大小的黑点，细胞碎片的话，通常大小不均一。

3、看培养基浑不浑浊：浑浊且发黄的话大概率就是微生物污染。

4、看细胞状态：细胞状态不佳就可能产生细胞碎片（特别是原代，特别容易产生碎片，所以我们切记要勤换液），此时可以加入清除试剂测试下，如果后面细胞状态有显著改善，这黑点可能就是由微生物污染了。

那细胞污染了怎么办呢？还能救的回吗？

一般的话，只要细胞污染，如果不是十分珍贵的细胞，我们建议是处理后丢弃，重新培养，因为要想完全去除细胞中的微生物污染是非常困难的！

但是吧，如果实在舍不得，也是有办法的，比如黑胶虫污染，黑胶虫污染主要源于血清，我们建议可以更换批次较好的血清、使用无菌的PBS洗细胞、换用一次性塑料培养瓶等等降低被污染的可能性。

黑胶虫污染处理步骤：

1、用0.25%的胰酶消化，当有少量细胞变圆或脱壁时，用血清终止消化。

2、用培养液或D-Hanks液清洗3遍（缓缓流过细胞表面），不要吹打，吹散细胞。

3、换培养瓶培养，隔天换液，2天后重复一次。

4、每24-36h换液一次，一周后，查看黑点是否基本消失。

如果不是污染，我们又怎么处理呢？

对于细胞碎片和凋亡小体，可以通过离心和更换新鲜培养基来清除。

如果是血清中的沉淀物，我们建议你不用热灭活处理血清，因为热灭活可能会增加沉淀物的形成。

好了，细胞污染的问题解决了，希望对大家的实验有一定的帮助~